Type V CRISPR 관련 transposon 복합체 조립을 위한 구조적 기반
Abstract
CRISPR-Cas 시스템은 RNA-guided transposition을 유도하는 Tn7과 유사한 전사 가능한 요소에 의해 유도된다. Type V-K CRISPR-associated transposons은 pseudonuclease Cas12k, AAA+ ATPase TnsC, Zn-finger protein TniQ 및 transposase TnsB의 결합 활성에 의존한다. 우리는 RNA-guided Cas12k, TniQ, polymeric TnsC filament 및 예기치 않게 ribosomal protein S15로 구성된 target DNA-bound Cas12k-transposon recruitment complex의 cryo 전자 현미경 구조를 제시한다. guide RNA, TniQ 및 S15와 관련된 상호작용에 의해 매개되는 Complex assembly는 R-loop completion을 초래한다. TniQ는 Cas12k-proximal filament 말단에서 두 개의 TnsC protomers와 접촉하여 중합을 생성할 가능성이 있다. Transposition activity 분석은 우리의 구조적 발견을 제공하며, S15가 type V crRNA-guided transposon machinery의 확실한 구성 요소임을 나타낸다. 전체적으로 우리의 연구는 대규모 DNA payloads의 부위별 삽입을 위한 프로그램 가능한 도구로서 발달을 가이드하는 CRISPR 관련 transposons의 RNA-mediated assembly를 뒷받침하는 주요 기계적 측면을 발견한다.